雙向凝膠電泳儀是基于蛋白質(zhì)電點(diǎn)不同用等電聚焦分離的,雙向凝膠電泳儀和凝膠成像儀同樣運(yùn)用比較多,那么,雙向凝膠電泳儀和凝膠成像儀有什么區(qū)別?
雙向凝膠電泳儀第一向基于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同用等電聚焦分離,第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離,把復(fù)雜蛋白混合物中的蛋白質(zhì)在二維平面上分開(kāi)。根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和分子量大小,分別在凝膠介質(zhì)二維空間上對(duì)蛋白質(zhì)分子進(jìn)行等電點(diǎn)聚焦和電泳來(lái)分離與純化蛋白質(zhì)。
雙向電泳就是等電聚焦電泳和SDS-PAGE的組合。
1、 先進(jìn)行等電聚焦電泳(按照蛋白等電點(diǎn)pI分離):在膠中加入雙性電解質(zhì)溶液,加上電場(chǎng)后建立穩(wěn)定PH梯度,蛋白質(zhì)溶液加入后建立電場(chǎng),蛋白以不同PI分離開(kāi)來(lái)。
2、然后再進(jìn)行SDS-PAGE(按照分子大小):將上一步的膠加上橫向電場(chǎng),同一PI中聚集的蛋白,由于分子量不同而分開(kāi)。
3、經(jīng)染色(一般是銀染)得到的電泳圖是個(gè)二維分布的蛋白質(zhì)圖。
二維電泳使用于蛋白組學(xué)研究,對(duì)大批量蛋白篩選鑒定中存在很大優(yōu)勢(shì),通過(guò)不同膠做對(duì)比,把不同處的膠割出來(lái)單獨(dú)鑒定。
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